β-galaktosidase dari Aspergillus oryzae telah dipegun dengan menggunakan teknik rangkaian silang agregat enzim (CLEA). Enzim dimendakan dengan menggunakan tert-butanol dan seterusnya berangkai silang dengan glutaraldehid untuk menghasilkan CLEA yang tidak larut serta bersifat aktif untuk process pemangkinan. Teknik lain seperti prarawatan β-galaktosidase enzim dengan surfaktan sebelum penyediaan CLEA telah dipraktiskan demi meningkatkan stabiliti dan activiti enzim semasa beroperasi. Kesan bagi beberapa parameter – seperti suhu, pH, jenis pemendak, kepekatan glutaraldehid serta jenis surfaktan – terhadap hasil aktiviti dan pemulihan CLEA telah dikaji untuk pengoptimuman cara penyediaan CLEA. CLEA serta CLEA dengan surfaktan prarawatan mempamerkan pH optima yang lebih lebar serta suhu optima yang lebih tinggi, berbanding dengan enzim bebas; menunjukkan kebaikannya, iaitu stabiliti operasi yang lebih tinggi, yang terdapat pada enzim imobil. Aktiviti enzim yang tertinggi telah didapati pada kes penyedianan enzim imobil yang menggunakan pemendak tert-butabol, kepekatan glutaraldehid pada 15% dan penambahan surfaktan Tween 20 untuk prarawatan enzim. Sehubungan dengan itu, CLEA yang melalui prarawatan Tween 20 didapati mengekalkan hampir 100% activiti pemulanya selepas proses immobil. Pengkajian kinetik bagi β-galaktosidase enzim juga telah disiasat untuk mendapatkan kinetik parameter. Galaktos telah diperkenalkan sebagai perencat, and ia telah dibuktikan sebagai perencat jenis kompetitiv terhadap enzim bebas and imobil. CLEA yang melalui surfaktan prarawatan memiliki nilai K’m yang paling rendah serta nilai KI yang paling tinggi, merupakan yang paling cemerlang dalam kalangan bentuk enzim yang dikaji dalam hasil kerja ini. Namum sedemikian, keburukan pada enzim tidak larut yang berpencar rendah telah mengecewakan keputusan pada CLEA dihasil. Hal ini menggesa para saintis untuk memperbaikkan cara penyediaan CLEA untuk menghasilkan CLEA yang berpencar tinggi.
_______________________________________________________________________________________________________
β-galactosidase from Aspergillus oryzae was immobilized using cross-linked enzyme aggregate (CLEA) technique. The enzyme was precipitated with tert-butanol and subsequently cross-linked with glutaraldehyde to obtain CLEA which is insoluble and catalytically active. Another technique with surfactant-pretreatment strategy was used on β-galactosidase before CLEA preparation in order to further improve the operational stability and activity of surfactant-CLEA. The effect of various parameters – temperature, pH, type of precipitant, glutaraldehyde concentration and type of surfactant – on the activity yield and recovery of the resulting CLEAs were studied for the optimization of preparation method. CLEA and surfactant pretreated CLEA exhibited a broader pH and higher optimum temperature compared to native enzyme, demonstrated the advantage of higher operational stability of the immobilized enzyme. The highest activity was obtained in the case of using tert-butanol precipitant, 15% of GA concentration and the addition of Tween 20 surfactant for enzyme pretreatment. Interestingly, Tween 20 pretreated CLEA was found to retain almost 100% of the initial activity after immobilization. Kinetic studies of β-galactosidase enzyme were also investigated to obtain the kinetic parameters. Galactose is introduced as inhibitor and proved to have competitive inhibitory effect toward both soluble and immobilized enzyme. CLEA with surfactant pretreatment excels among all forms of enzyme studied in the presence work with the lowest K’m and highest KI value. However, the low dispersibility of insoluble enzyme made a draw back in the resultant CLEA yield, urging the need to improvise the CLEA preparation method for getting CLEA with higher dispersibility.
Preparation of cross-linked enzyme aggregate (clea) of beta-galactosidase with the presence of surfactant / Goh Chen Yee